T7 RNA Polymerase

· 产品介绍

T7 RNA Polymerase（T7 RNA 聚合酶）是一种高度特异识别T7启动子序列的DNA依赖的5'→3'RNA聚合酶，分子大小为99kDa。T7 RNA Polymerase以含有T7启动子序列的单链或双链DNA为模板，NTP为底物，合成与启动子下游的单链DNA或双链DNA模板链互补的RNA。

· 产品组分

· 数据展示

体外转录获得的RNA

· 产品应用

1）用于mRNA，siRNA，dsRNA，gRNA等的合成。

2）合成标记或未标记的高特异性 RNA 探针。

· 活性定义

37℃温度下，60分钟内，催化1nmol AMP掺入到多聚核苷酸中所需的酶量，定义为1个活性单位（U）。

· 产品性质

· 使用方法

1）使用线性化DNA模板（用苯酚/氯仿提取 DNA，然后用氯仿/异戊醇提取DNA，然后用乙醇沉淀。 将DNA溶解在经DEPC处理的水(ZS-BU007)中）。

2）制备以下反应混合物：

3）37 °C孵育4 ~ 16 小时。

4）可选：

① 使用质粒DNA做模板时，转录产物片段大于预期，可加入2µL(2U)RNase I，无RNase污染(#ZS-EN005)，混合并在37°C下孵育15分钟。

② 要去除模板DNA，添加2µL(2U)DNase I，无RNase污染(#ZS-EN004)，混合并在37°C 下孵育15分钟。

5）通过苯酚/氯仿提取使DNase I失活。

· 注意事项/操作建议

1）-30 ~ -15℃保存，≤ 0℃运输。

2）DNA模板的种类：推荐使用含T7启动子的线性化质粒或PCR产物作为模板。

3）转录模板的纯度会显著 影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RNaseA会显著影响转录RNA的质量。推荐使用通过酚氯仿抽提的质粒DNA或胶回收纯化后的PCR产物为模板。

4）实验室时请佩戴一次性手套及口罩，以避免产物被RNase降解。

5）转录反应在RNase-free的环境中进行。

6）本产品仅限于专业人员的科学研究用。