Thermostable T7 RNA Polymerase
· 产品信息
T7 RNA Polymerase(T7 RNA聚合酶)为重组E.coli表达的噬菌体T7 DNA编码的蛋白，是一种高度特异性识T7启动子序列的DNA依赖的5'→3' RNA聚合酶。本制品以含有T7启动子序列的单链或双链DNA为模板，NTP为底物，合成与启动子下游的单链DNA或双链DNA模板链互补的RNA。
Thermostable T7 RNA Polymerase（热稳定型T7 RNA聚合酶，ZS-EN002-01）是T7 RNA Polymerase（ZS-EN001-01）的升级版，与 T7 RNA Polymerase相比它能够耐高温，在 42-50℃高温处理1h后还能保持转录酶活性，且活性稳定。具有提升GC含量较高RNA的转录效率、提升长片段dsRNA的合成能力、减少dsRNA副产物的形成、降低合成RNA的免疫原性等优点。
· 产品组分
· 数据展示
热稳定性测试
· 产品应用
1）用于mRNA，siRNA，dsRNA，gRNA等的合成。
2）合成标记或未标记的高特异性 RNA 探针。
· 活性定义
37℃温度下，60分钟内，催化1nmol AMP掺入到多聚核苷酸中所需的酶量，定义为1个活性单位（U）。
· 产品性质
· 使用方法
1）使用线性化DNA模板（用苯酚/氯仿提取 DNA，然后用氯仿/异戊醇提取DNA，然后用乙醇沉淀。 将DNA溶解在经DEPC处理的水(ZS-BU007)中）。
2）制备以下反应混合物：
3）37 °C孵育4 ~ 16 小时。
4）可选：
① 使用质粒DNA做模板时，转录产物片段大于预期，可加入2µL(2U)RNase I，无RNase污染(#ZS-EN005)，混合并在37°C下孵育15分钟。
② 要去除模板DNA，添加2µL(2U)DNase I，无RNase污染(#ZS-EN004)，混合并在37°C 下孵育15分钟。
５）通过苯酚/氯仿提取使DNase I失活。
· 注意事项/操作建议
1）-30 ~ -15℃保存，≤ 0℃运输。
2）DNA模板的种类：推荐使用含T7启动子的线性化质粒或PCR产物作为模板。
3）转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RNaseA会显著影响转录RNA的质量。推荐使用通过酚氯仿抽提的质粒DNA或胶回收纯化后的PCR产物为模板。
4）实验室时请佩戴一次性手套及口罩，以避免产物被RNase降解。
5）转录反应在 RNase-free 的环境中进行。
6）本产品仅限于专业人员的科学研究用。
